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BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明
更新時(shí)間:2016-03-23   點(diǎn)擊次數(shù):5856次

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明

試劑盒組成

包裝(500微孔)

保存

BCA試劑

100ml

2-8

Cu試劑

3ml

2-8

PBS稀釋液

30ml

2-8

BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn) (5mg/ml BSA)

1ml

 -20

本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做500孔。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做50孔,如果是1ml比色皿時(shí)可做100孔。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+ Cu+BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,測(cè)定其在562nm處的吸收值,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100Tween不影響檢測(cè)結(jié)果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類(lèi)的影響。實(shí)驗(yàn)中,若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

使用說(shuō)明

一,微孔酶標(biāo)儀法

1.         配制工作液根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時(shí)可能會(huì)有渾濁,但混勻后就會(huì)消失)BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.         稀釋標(biāo)準(zhǔn)品:取10微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋?zhuān)?,使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4,6,8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,加PBS補(bǔ)足到20微升。

3.         將樣品作適當(dāng)稀釋?zhuān)ǘ嘧鰩讉€(gè)梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋?zhuān)?0微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差,標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液,37放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測(cè)定A562nm,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時(shí),應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。

 二,分光光度計(jì)法

如沒(méi)有酶標(biāo)儀,可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下:

1.配制工作液根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時(shí)可能會(huì)有渾濁,但混勻后就會(huì)消失)BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2,  稀釋標(biāo)準(zhǔn)品:取100微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至1ml(樣品一般可用PBS稀釋?zhuān)?,使終濃度為0.5mg/ml

3,  取八支(或者更多)5ml離心管,標(biāo)讓號(hào),按下表加入試劑。

離心管號(hào)

1

2

3

4

5

6

7(樣品管1

8(樣品管2

9(樣品管3

標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA

0

40ul

80ul

120ul

160ul

200ul

200ul適當(dāng)稀釋的樣品1

樣品2

……

PBS

200ul

160ul

120ul

80ul

40ul

0

0

0

0

BCA工作液

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

 

4,  37放置15-30分鐘。用分光光度計(jì)測(cè)562nm處吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。

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