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辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝 NobleRyder P1100

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  • 更新時(shí)間:2024-08-28
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北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝 NobleRyder P1100量大優(yōu)惠,咨詢 :

 

 

辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝 NobleRyder P1100

 

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝 NobleRyder P1100量大優(yōu)惠,咨詢 :      1215878164

 

辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝

組成

規(guī)格

HRP(辣根過氧化物酶)

10mg

NaIO

500mg

NaBH

100mg

100mM乙酸鈉(PH4.4

5ml

0.2M PH9.5 CB

25ml

透析袋MD10(8000-14000)

20CM

透析袋MD25(8000-14000)

20CM

鐵夾(夾透析袋)

兩支

保存條件HRP(辣根過氧化物酶)-20度保存,透析袋28度處理。其他常溫保存。

產(chǎn)品說明:本套裝是將HRP標(biāo)記的常用試劑集合為一體而成。本操作流程為經(jīng)碘的高碘酸氧化法。適合于蛋白等含有氨基物質(zhì)的標(biāo)記。特別是抗體的標(biāo)記。

如果待標(biāo)記物分子量太小(如小于15KD),可能會(huì)穿過透析袋而造成樣品損失。

標(biāo)記原理:在低PH下使RP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛基可蛋白等分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,后者可進(jìn)一步用NaBH4還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記物。

操作方法:

一,  標(biāo)記量的計(jì)算:HRP(辣根過氧化物酶)分子量為40KD左右。一般為HRP:待標(biāo)記物=2141之間。比如抗體IgG分子量一般為150160KD。則10mg HRP可標(biāo)記抗體在10mg-20mg之間。

二,  計(jì)算好各步反應(yīng)時(shí)間。作好開始標(biāo)記的準(zhǔn)備工作,是從下午開始。將HRP(辣根過氧化物酶)一共10mg加入1ml雙蒸水溶解。溶解后可放-20度存放一個(gè)月。如果想作兩次標(biāo)記,可適當(dāng)稱量5mg。但并不推薦稱量更小的質(zhì)量。以免產(chǎn)生更大誤差。而且透析袋一般也只夠兩次用量。

三,  剪切合適長度透析袋,用雙蒸水清洗三次備用。透析袋分寬窄兩種,適合于不同量樣品的透析,請自己安排。稱取21.3mg NaIO4,加入0.5ml雙蒸水溶解現(xiàn)配現(xiàn)用,濃度為0.2M,將100mM乙酸鈉(PH4.4)用雙蒸水稀釋100倍成1mM乙酸鈉(PH4.4)。準(zhǔn)備待標(biāo)記物,如果待標(biāo)記物本身鹽含量很低并且緩沖力差,如生理鹽水,可等二天再準(zhǔn)備。如果不確定,將0.2M PH9.5 CB稀釋20倍(請不要一次稀釋完,留12ml左右備用),作為透析液,將待標(biāo)記物裝入透析袋中4透析過液,透析袋適當(dāng)留長約2ml體積的量以備第二天加入酶(透析袋使用請見附錄)。

四,  以一次標(biāo)記完為例,如果標(biāo)記量小,可按比例減小試劑的用量。取0.2ml現(xiàn)配的NaIO4溶液加入HRP溶液中,混勻,避光常溫反應(yīng)兩小時(shí)。裝入透析袋中,在稀釋過的乙酸鈉(PH4.4)溶液中4透析過液(透析袋使用請見附錄)。

五,  第二天早上,如果樣品為固體,可用水溶解,加入1/20體積的0.2M PH9.5 CB,混勻。取出活化好的HRP裝入一適合離心管中,加入50ul  0.2M PH9.5 CB,混勻,立刻加入待標(biāo)記物中,混勻。避光常溫反應(yīng)兩小時(shí)。

六,  0.1ml新配的10mgml NaBH4液,混勻,常溫半小時(shí)。

七,  配制合適的透析液,如生理鹽水或者PBS等。透析酶標(biāo)記物。

八,  如果有條件進(jìn)一步純化,可透析半天后去進(jìn)一步純化,如果不純化,請?jiān)?/span>4透析至少24小時(shí)。勤換液。

 

附透析袋使用方法:

本透析袋已預(yù)處理過,用雙蒸水清洗后將水用適當(dāng)吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用鐵夾,但如果鐵夾不夠用,下部可用細(xì)線或者其他的透析袋夾。

將透析袋輕輕的折上兩到三折。用線或者透析袋夾封住,上面支開,加入待透析物,留一定量的空氣在頂上,并小心的折一折,用鐵夾夾住,輕輕的擠壓,如沒發(fā)現(xiàn)有液體流出,可放入透析液中。一般透析可用純凈水瓶去頂使用。用一次性筷子或者其他合適物穿過鐵夾,將透析袋吊在透析液中,補(bǔ)充透析液,使透析液蓋過透析袋中的液面而不要淹過鐵夾下面。

 

 北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司,公司主要經(jīng)營的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。

 

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