日韩免费不卡视频-日韩美在线-日韩美一区二区三区-日韩美视频网站-国产成人精品区在线观看-国产成人精品女人不卡在线

產品目錄
產品展示
當前位置:首頁 > 全部產品 > > NobleRyder > C0836NobleRyder 嘌呤霉素儲存液(1mg/ml)

NobleRyder 嘌呤霉素儲存液(1mg/ml)

  • 型   號:C0836
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-09-21
  • 廠家性質:經銷商

NobleRyder 嘌呤霉素儲存液(1mg/ml)
NobleRyder 即用型液體試劑 C0836-1mL
NobleRyder 即用型液體試劑 C0836-5×1mL

   Puromycin是來源于Streptomyces alboniger的一種氨基核苷類抗生素,中文名為嘌呤霉素,常用于篩選通過質粒轉染/轉化、病毒感染等方法能表達pac基因(puror)的真核或原核多克隆或單克隆細胞。Puromycin不僅用于穩定細胞株的篩選,也用于穩定細胞株的維持。
    Puromycin的特點是快速作用于細胞,一般2天內可以殺死99%的不表達pac基因的細胞。
    在革蘭氏陽性菌、動物或昆蟲細胞中,嘌呤霉素通過抑制蛋白質合成而抑制或殺死細胞。其作用機制為嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3'末端的類似物,能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素與A位點結合后,不會參與隨后的任何反應,從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
Pac基因表達嘌呤霉素N-乙酰轉移酶(Puromycin N-acetyl-tranferase),該基因是在Streptomyces alboniger中發現的。如果表達基因,就會對嘌呤霉素產生抗性,這一特性目前普遍應用于篩選表達pac基因的哺乳動物穩定細胞株等。例如,很多商業化的慢病毒載體都攜帶pac基因(一般在質粒圖譜上標記為puror),從而利用嘌呤霉素篩選特定基因的穩定表達細胞株。嘌呤霉素也可以用來篩選表達pac基因的大腸桿菌菌株、酵母菌株等。
NobleRyder 嘌呤霉素儲存液(1mg/ml)

使用方法
 1.建議使用濃度
 哺乳動物細胞:1-10 μg/mL,優良濃度需要殺滅曲線來確定;
 大腸桿菌:LB瓊脂培養基篩選穩定轉化pac基因的大腸桿菌,使用濃度為125μg/mL。注:使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩轉株需要精確的pH值調節,而且受宿主細胞本身的影響。
2. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定(以shRNA轉染或者慢病毒轉導為例)
 嘌呤霉素有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關。為了篩選到穩定表達的shRNA細胞株,確定殺死未轉染/轉導細胞的*低濃度嘌呤霉素至關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線(kill curve)。
 1) Day 1:24孔板內以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板,鋪足夠量的孔以進行后續的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜;
 2) Day 2:a)準備篩選培養基:含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養基(如0-15μg/mL,至少5個梯度);b)往孵育過夜后的細胞內更換新鮮配制的篩選培養基;之后37℃孵育細胞;
 3) Day 4:更換新鮮的篩選培養基,并觀察細胞存活率。
 4) 根據細胞的生長狀態,約2-3天更換新鮮的篩選培養基;
 5) 每日監測細胞,觀察存活細胞率,從而確定抗生素篩選開始4-6天內有效殺死非轉染或者所有非轉導細胞的藥物*低濃度。
 3. 哺乳動物穩定轉染細胞株的篩選
 等轉染含有pac基因的質粒后,細胞在含有嘌呤霉素的培養基中增殖,以篩選出穩定轉染子。
 1)細胞轉染48h后,將細胞(原樣或稀釋)置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養基中培養。
 注意:當細胞處于分裂活躍期時,抗生素作用*明顯。細胞過于密集,抗生素產生的效力會明顯下降。最好進行細胞分盤使其密度不超過25%。
 2)每隔2-3天,移除和更換含有嘌呤霉素的培養基。
 3)篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間,這依賴于宿主細胞系和轉染篩選效率。注意:每日進行細胞生長狀態的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h,有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
 4)轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養皿中,用選擇培養基繼續培養7天。此次富集培養是為日后的細胞毒性實驗做準備。
 
注意事項
 1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 NobleRyder 嘌呤霉素儲存液(1mg/ml)

留言框

  • 產品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細地址:

  • 補充說明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7

北京諾博萊德科技有限公司 版權所有
京ICP備12025092號-2   sitemap.xml
電話:
010-62817090
  • 點擊這里給我發消息
  • 點擊這里給我發消息
  • 點擊這里給我發消息
主站蜘蛛池模板: 日韩在线专区| 欧美专区日韩| 日韩成人在线电影| 92国产福利久久青青草原| 一级毛片黄| 可以看的毛片网站| 99精品国产高清一区二区三区香蕉 | 国产成人久久蜜一区二区 | 日韩在线无| 夜夜操夜夜| 在线国产一区二区三区| 亚洲天堂一区二区三区| 日韩高清在线观看| 伊人精品视频| 日本不卡一区二区三区四区| 精品一区二区三区四区| 国产精品免费观看视频播放| 久久亚洲一级α片| 久久国产精品电影| 91视频一区二区三区| 九九精品免视看国产成人| 毛片视频网站| 99久久精品国产一区二区三区| 欧美孕妇性xxxⅹ精品hd| 成人精品第一区二区三区| 日本色图在线| 国产不卡在线视频| 欧美日韩国产高清| 日韩精品一区二区三区在线观看l| 欧美日韩精品一区二区三区高清视频| 久久久久久穴| 欧美日韩国产高清| 国产精品久久久久久久专区| 男女激情网址| 国产精品久久久久aaaa| 欧美无极品| 91视频国产91久久久| 欧美亚洲综合在线观看| 欧美91精品久久久久网免费| 久久久国产成人精品| 熟年交尾五十路视频在线播放|